Avaliação de diferentes protocolos de criopreservação para células-tronco mesenquimais caninas

Resumo

Introdução: as células-tronco mesenquimais (CTM) são candidatas para o reparo tecidual e controle da inflamação no tratamento de diversas doenças veterinárias. Neste contexto, é importante a criopreservação dessas células para a criação de biobancos e disponibilidade imediata em terapêuticas celulares, garantindo a manutenção de suas características funcionais e  transporte adequado. Objetivos: expandir in vitro e caracterizar morfologicamente as CTM de cães; avaliar diferentes protocolos de criopreservação para as CTM, tendo como padrão a criopreservação de células VERO que são células de linhagem contínua provenientes de rim de macaco. Metodologia: as CTM foram extraídas do tecido adiposo subcutâneo de cães utilizando a enzima colagenase tipo II e fragmentação física, e caracterizadas morfologicamente por microscopia óptica. As células VERO foram expandidas in vitro a partir de uma cultura secundária. A avaliação de um protocolo de criopreservação eficiente para as CTM tendo como padrão as células VERO foi feita utilizando-se dois protocolos: “Protocolo A”, solução contendo 10% dimetilsulfóxido (DMSO) em soro fetal bovino (SFB); “Protocolo B”, solução contendo 5% DMSO e 20% SFB, em meio RPMI. Em ambos os protocolos as células foram congeladas a -80°C por 30 dias e a viabilidade das CTM e das células VERO foi analisada, antes e após o congelamento, por coloração em Azul de Trypan 0,4% em PBS. Resultados e discussão: as células extraídas do tecido adiposo de cães apresentaram morfologia semelhante a fibroblastos e aderência à plataforma de cultura, com um tempo de confluência reduzido a cada passagem de cultura. Após trinta dias da criopreservação, as CTM apresentaram viabilidade de 71,2% e 72%, quando recuperadas dos protocolos A e B, respectivamente. Em comparação com as células VERO que apresentaram uma viabilidade de 80,90% e 68,5%, quando recuperadas dos protocolos A e B, respectivamente, ambos os protocolos foram adequados para o congelamento das CTM, uma vez que não se observou diferenças significativas na viabilidade celular antes e após o congelamento. Entretanto, as células VERO foram recuperadas com uma viabilidade maior quando se utilizou o protocolo A. Isto pode ser explicado pela porcentagem maior de SFB no protocolo A. Conclusão: a depender da linhagem celular, o protocolo de congelamento celular poderá interferir na viabilidade da célula após o descongelamento. Além disso, o uso de uma porcentagem maior de SFB poderá favorecer a recuperação celular.